如何規范的操作數字PCR儀？來(lái)看看萊尚生物科技是怎么做的吧

　　數字PCR儀是一種核酸分子一致定量技術(shù)。目前有三種方法用于核酸分子的定量，普通PCR半定量通過(guò)灰度進(jìn)行定量；熒光定量PCR通過(guò)Ct(Cq)值進(jìn)行相對定量；數字PCR是較新的定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計數的核酸定量，是一種一致定量的方法。主要采用微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中，每個(gè)反應器的核酸模板數少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過(guò)PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應器就會(huì )給出熒光信號，沒(méi)有模板的反應器就沒(méi)有熒光信號。根據數字PCR 反應單元總數和有熒光信號的單元數以及樣品的稀釋倍系數，就可以得到樣本的最初拷貝數(濃度)。

　　注意：

　　1. Sock時(shí)，溫度應設為10℃，時(shí)間不要超過(guò)30分鐘。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)長(cháng)，易導致儀器的損壞。

　　2. 操作時(shí)，要嚴格遵守以上原則，及時(shí)記錄儀器運行的情況。

　　保養：

　　1．樣品池的清洗

　　先打開(kāi)蓋子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液體，用棉簽吸干剩余液體；打開(kāi)PCR儀，設定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運行，讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5～10min即可。

　　2．熱蓋的清洗

　　對于數字PCR儀，當有污染出現，而且這一污染并非來(lái)自樣品池時(shí)；或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時(shí)，需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面，確保樣品池的孔鏡干凈，無(wú)污物阻擋光路。

　　3．儀器外表面的清洗

　　清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂，但達不到消毒的效果。選擇沒(méi)有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。

　　4．更換保險絲

　　先將PCR儀關(guān)機，拔去插頭，打開(kāi)電源插口旁邊的保險盒，換上備用的保險絲，觀(guān)察是否恢復正常。

　　維修：

　　1.PCR儀器需要定期檢測，視制冷方式而定一般半年至少一次。

　　2.PCR反應的要求溫度與實(shí)際分布的反應溫度是不一致的，當檢測發(fā)現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1～2℃時(shí)，可以運用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應溫度差。

　　3．PCR反應過(guò)程的關(guān)鍵是升、降溫過(guò)程的時(shí)間控制，要求越短越好，當PCR儀的降溫過(guò)程超過(guò)60s，就應該檢查儀器的制冷系統，對風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵；對其他制冷系統應檢查相關(guān)的制冷部件。

　　4．一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí)，不要輕易打開(kāi)或調整數字PCR儀的電子控制部件，必要時(shí)要請專(zhuān)業(yè)人員修理或利用儀器電子線(xiàn)路詳細圖紙進(jìn)行維修。