數字PCR儀實(shí)現了定量及稀有等位基因的檢測

　　數字PCR儀是一種核酸檢測和定量分析的新方法，可以作為傳統實(shí)時(shí)定量PCR的替代方法，以實(shí)現一致定量及稀有等位基因的檢測。數字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應，部分這些反應包含了靶標分子（陽(yáng)性），而其他不包含（陰性）。單個(gè)分子可以被擴增一百萬(wàn)倍或更多。在擴增期間，TaqMan化學(xué)試劑及染料標記探針可用于檢測特定序列的靶標。當不存在任何靶標序列時(shí)，沒(méi)有信號累積。PCR分析后，陰性反應片段用于生成樣品中靶標分子的一致計數，而無(wú)需標準品或內標。

　　納流芯片的使用提供了便捷和直觀(guān)的機制來(lái)同時(shí)平行運行上千個(gè)PCR反應。每個(gè)孔都加入了樣品、擴增混合物和TaqMan測定試劑的混合物，然后進(jìn)行單獨分析以檢測存在（陽(yáng)性）或不存在（陰性）終點(diǎn)信號?？紤]到孔可能接收到多個(gè)靶標序列分子，使用泊松模型應用了一個(gè)校正因子。

　　數字PCR儀和試劑能夠提高現有TaqMan測定的性能，從而實(shí)現更高的靈敏度、精度和一致定量，使應用從中獲益。

　　PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專(zhuān)一性的連鎖復制。在使用PCR儀的過(guò)程中需要注意以下事項：

　　1）環(huán)境要恒定，運作環(huán)境的溫度不能過(guò)高或過(guò)低，在用空調的房間使用，有些PCR儀有溫度保護程序，在過(guò)低的溫度下機器不能啟動(dòng)。

　　2）電源要穩定，工作的電壓不能波動(dòng)過(guò)大，波動(dòng)過(guò)大會(huì )造成電子器件損壞，一般建議將PCR儀電源接于穩壓電源上。

　　3）盡量不要保存過(guò)夜，能經(jīng)常使用就不容易壞。

　　4）數字PCR儀在使用前要詳細閱讀使用說(shuō)明書(shū)，遇到不能解決的問(wèn)題不要隨意拆卸儀表，打電話(huà)咨詢(xún)廠(chǎng)家或技術(shù)支持部門(mén)，通過(guò)指導進(jìn)行維修。